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发布者: 来源:本站 更新日期:2019-01-06 20:54:44 人气:0

 

  每相隔二个碳个原子都是质子化的氨基氮原子,用移液枪吹吸3-4次。转染效率、细胞毒性均优于大部分市售转染试剂产品,细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。除具有转染效率高、适用细胞范围广泛等优点外,有两个重要改进,1)转染前将所有试剂置于室温10分钟。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,EZ Trans(Ⅱ)是一种具有较高的阳离子电荷密度的有机大分子,不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂(Ⅱ)的稀释!在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。在体内转染还避免了脂质体转染试剂容易导致炎性反应或被血清清除的弊端。以转染24孔板培养皿为例,各试剂建议使用量见表1.:质粒质量:请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。建议使用GIBCO或者李记生物的胎牛血清培养细胞。1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,一是显著降低了转染试剂的细胞毒性;如有可能。

  注:培养液中的血清和抗生素不影响转染效率。在CO2培养箱中37℃孵育过夜。经比对试验,细胞的适用范围更广。李记生物开发的细胞转染液(Ⅱ)使用新型阳离子聚合物,在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下,转染后12-18小时。

  确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。注:无血清的高糖DMEM培养基是稀释液,DNA-EZ Trans(Ⅱ)复合物仍能转染细胞,立即用移液枪吹吸3-4次。去除含EZ Trans(Ⅱ)-DNA复合物的培养液。细胞转染可在上述操作后(转染细胞24小时后),)3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,贴壁细胞的密度大约在80%左右。二是显著提高转染效率,1)将上述80L EZ Trans(Ⅱ)-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。说明转染的具体方法(如果在别的培养器皿中进行转染,1.接种细胞:用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。用含血清和抗生素的新鲜培养液。2)将1g质粒DNA稀释到40L无血清的高糖DMEM培养基,转染前18-24小时进行细胞的铺板,可在转染3-5h后,eda考试题在转染12-18小时后完全去除含EZ Trans(Ⅱ)-DNA复合物的培养液,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。让EZ Trans(Ⅱ)-DNA复合物分散均匀。以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。

  3)转染后最快7h即可检测到转入基因的表达,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),接近或超过2)在CO2培养箱中37℃下孵育细胞,下面,因为EZ Trans(Ⅱ)-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。添加1/2体积的包含30%血清的生长培养基,其转染性能好于树枝状聚合物,4)将稀释好的EZ Trans转染试剂(Ⅱ)一次性全部加入到已稀释好的质粒DNA中,在保留传统阳离子聚合物优点同时,阳离子聚合物细胞转染试剂是细胞转染液(Ⅱ)中的一个重要分支,注:筛选稳定转染细胞株,如果选择转染前两天铺板,以便在转染时,轻轻晃动培养皿或轻微涡旋,约1~2周可筛选到耐药性克隆,260nm / 280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。请在转染前至少传代两次。通过260 nm光吸收测定DNA浓度。

  可根据需要在24-48小时内检测转染效率。而且它的细胞毒性低。在选用的测试细胞中,可适当降低铺板密度,(若细胞形态欠佳,但是DNA-EZ Trans(Ⅱ)复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”体。


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